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植物细胞组织培养基本技术《基本设备篇》
更新时间:2013.12.21   来源:超净工作台   浏览次数:

植物细胞组织培养基本技术《基本设备篇》

内容提要:植物细胞绀织培养是一种技术性较强的工作。为了确保组织培养工作的顺利进行,必须具备最基本的实验设备条件,并要求熟练掌握植物离体培养的基本技术,包括培养基的配制、外植体的选择与处理无菌技术、环境条件控制等。

一、基本设备的选择:无菌室、超净工作台

植物细胞组织培养,同微生物培养相比,培养时长,短则1个月,长时可能长达几年的时间,因此在操作和培养过程中,最重要的是防止细菌等的感染,无菌设备非常重要。

无菌室

无菌室主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的继代转移等。这里是植物组织培养研究中最关键的部分,关系到培养物的污染率.接种工作教率等重要指标要求地面、天花板、四壁尽可能光洁、无尘,易于采取各种清沽和消毒措施(门窗要求密闭,一般用滑动门窗。不安装风扇,保证没有空气对流,通风换气需通过空气调节装置进行)一般设内外两间,外间小些为准备室(供操作人员更换工作服、工作帽、拖鞋,洗手及处理外界采样准备、无菌培养的材料等,以防止带人病菌,保证无菌室能长时间和大量进行无菌操作)。内间稍大,供接种用。

无苗室内应安有紫外灯,在操作前至少开灯20min。同时室内应定期用甲醛和高锰酸钾蒸气熏蒸(或用70%酒精或0.5%苯酚啧雾降尘和消毒)。无菌操作室需备有固定式载物台、移动式载物台、广口瓶、酒精灯、酒精棉、器械支架、手术剪、解剖刀、解剖针、镊子等用于接种。近年来,多数实验室都采用超净工作台来代替无菌操作室。超净工作台不仅操作方便,而且效果也很好。

超净工作台

超净工作台现已成为植物组织培养上最常用、最普及的无菌操作装置,与接种箱及无菌室相比超净工作台既方便又舒适,无菌效果又好。它有单人、双人及三人式的,也有开放和封闭式的,根据风幕形成方式,又分为垂直式和水平两种。

超净工作台一般由鼓风机、过滤器、操作台、紫外光灯和照明灯等部分组成。通过内部小型电动机带动风扇,使空气先通过一个前置过滤器,滤掉大部分尘埃,再经过一个细致的高效过滤器,将大于0.3的颗粒滤掉,然后使用过滤后的不带细菌、真菌的纯净空客年供气以每分钟24-30m的流速,吹过工作台操作面,此气流速度能避免坐在超净工作台旁操作人员造成轻微气流污染培养基。

一般来说在开始操作前,应该先将所用的器械等放在工作台面上,堆放太高,以免挡住气流,初次使用超净工作台要在开启2小时后,再开始接种操作,以后每次开启10-15min 即可操作。

为了提高超净工作台的效率,超净工作台应放置在空气干净、地面无灰尘的地方,可以延长使用寿命,应定期检测工作台工作面的空气流速,定期清洗和更换过滤装置。

待续……
2013年12月23日 更新:植物细胞组织培养基本技术《用具的选择》,敬请关注,谢谢!

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